一．培养基及培养冻存条件准备：

1. 准备RPMI-1640培养基，90%；优质胎牛血清，10%。
2. 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3. 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
   • 细胞处理：
4. 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
5. 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
6.  

1.      将培养瓶中细胞轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液。

2.      根据细胞的生长状态，按1:2或以上比例用新鲜培养基重悬细胞，将合适量培养液移入到T-25培养瓶中或T-75培养瓶中培养。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。悬浮细胞直接计数后离心，用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X10⁶个细胞冻存。